微生物可以低溫保存,低溫保存法有廣泛的微生物保存法。對于需要雜亂養(yǎng)分的微生物種,如果不能堅持其生命力(如植物病原性真菌)的其他儲存方法,一般可以低溫保存。
這種方法是以較慢的冷凍速度(1℃/分鐘)冷凍存在于小管或安瓿中的細胞,直到-150℃,然后將這些小管保存在-150℃。~-在196℃的液氮中。低溫冷凍保護劑不同于冷凍干燥法中使用的冷凍劑。甘油(10%)是ATCC常見的一種、大多數(shù)細胞株由二甲亞(5%)和培養(yǎng)液制成的混合物保存。
這些化學物質進入細胞可以防止內膜的冷凍損傷。在低溫容器中保存細胞恢復時,需要小心操作。當管道被加熱時,形成的霜會殺死細胞,正確操作可以防止這種麻煩。只有快速凍結樣品,才能減少活力的喪失。方法是將密封的管道迅速放入37℃的水中,直到所有的冰都溶解,然后打開管口,將內容物移入培養(yǎng)液。低溫保存的微生物需要保存在非常低溫的環(huán)境中,所以需要液氮罐。在長期儲存過程中,需要經常注意液氮的填充。
與凍干法相比,這種儲存方法需要更多的資金,包括勞動力和液氮等,以保持儲存溫度。金鳳液氮罐
1數(shù)據(jù)病毒低溫保管所需數(shù)據(jù)包括:熱收縮塑料管、液氮罐、防護手套及面罩、標記筆、氣體噴燈、液氮保溫瓶。
2方法
(1)剪一段兩端各超過冷凍管長度2cm的熱縮塑料管。金鳳液氮罐
(2)將含有清除病毒懸液(安排培養(yǎng)的上清培養(yǎng)液,或安排培養(yǎng)液中的細胞溶解物)的上清懸液冷卻幾分鐘,用殺菌移液管將0.2ml冷卻后的上清懸液分配到冷凍管中,并擰緊蓋子。
將病毒冷凍管放入熱收縮塑料管中,刺入正確的標簽。
(4)用噴燈小心加熱收縮塑料管,并將其包裹在冷凍管中。切記不要在過高的溫度下加熱收縮塑料管。
再次小心加熱收縮塑料管的兩端,用大鑷子將管端口夾緊至完全密封。
(6)在配有液氮的保溫瓶中快速冷凍密封的冷凍管(操作時需戴口罩和手套)。
(7)將冷凍冷凍管放入液氮罐內的格子中,一起記錄樣品的具體存放方向、實驗編號、存放日期等。
(8)需求耗時,從液氮罐中快速取出所需樣品,放入37℃水浴箱冷凍后,用解剖刀將熱收縮塑料管用冷凍管的硅化墊圈切開。擰開冷凍管的蓋子時,不需要去除熱收縮塑料管。
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